TCF7L2/TCF4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400607-NIC

TCF7L2（TCF4としても知られる）は、カノニカルなWnt/β-カテニンシグナル伝達の主要な核内エフェクターとして機能する高移動度群（HMG）ボックス型転写因子をコードします。TCF7L2はβ-カテニンや共調節因子と複合体を形成することで、腸上皮や内分泌膵を含む多様な組織環境において、細胞運命の決定、増殖、分化を制御する転写プログラムを調節します。TCF7L2依存的な制御はクロマチンのアクセシビリティに影響し、発生および代謝経路からのシグナルを統合して、状況依存的な遺伝子発現を形成します。TCF7L2の遺伝的変異や活性の破綻は代謝形質や2型糖尿病リスクとの関連が報告されており、Wnt/TCFによる異常な転写出力はがん研究や幹細胞生物学で頻繁に検討されています。

TCF7L2/TCF4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TCF7L2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TCF7L2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TCF7L2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TCF7L2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。