TCF7L2/TCF4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400607-ACT

TCF7L2（TCF4とも呼ばれる）は、高移動度群（HMG）DNA結合型の転写因子をコードしており、カノニカルなWnt/β-カテニンシグナル伝達における主要な核内エフェクターとして機能します。TCF7L2はTCF/LEF応答配列上でβ-カテニンと複合体を形成することで、細胞運命の決定、増殖、分化、代謝恒常性を制御する遺伝子プログラムを調節します。ヒト組織では、TCF7L2の活性は内分泌系および上皮系の転写ネットワークに影響を与え、血糖調節や発生パターニングの文脈でしばしば研究されています。TCF7L2の遺伝学的変化や発現変動は、代謝形質や複数のがんと関連付けられており、疾患に結び付いた制御回路における幅広い重要性を示しています。

TCF7L2/TCF4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TCF7L2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TCF7L2/TCF4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TCF7L2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTCF7L2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TCF7L2/TCF4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTCF7L2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTCF7L2/TCF4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTCF7L2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTCF7L2/TCF4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。