Plásmido CRISPR de Activación (h) TCEA3: sc-408517-ACT

TCEA3 codifica el factor de elongación transcripcional A3, una proteína de la familia TFIIS que se asocia con la ARN polimerasa II para estimular la escisión del transcrito y rescatar complejos de elongación retrocedidos, favoreciendo una síntesis productiva de ARNm. Al modular la fidelidad de la elongación y el reinicio, TCEA3 contribuye a la homeostasis transcripcional global e influye en programas celulares vinculados a la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La desregulación del control de la elongación por la polimerasa II y de la actividad de TFIIS se ha implicado en defectos de estabilidad genómica y en estados transcripcionales alterados observados en múltiples contextos de enfermedad, incluidos el cáncer y trastornos del desarrollo. Como regulador transcripcional, TCEA3 es una diana útil para estudiar cómo los factores de elongación ajustan redes de expresión génica y salidas de vías de señalización en células humanas.

TCEA3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TCEA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TCEA3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TCEA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TCEA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TCEA3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TCEA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TCEA3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TCEA3 en células tumorales con expresión de TCEA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.