TBX5 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423282-ACT

Tbx5 は、T-box 型転写因子 TBX5 をコードしており、マウスにおいて心臓の心室・心房などの心腔形成、刺激伝導系の成熟、ならびに前肢の形態形成を制御する発生遺伝子プログラムを統括する、配列特異的 DNA 結合型の調節因子です。TBX5 は NKX2-5 や GATA4 などの補因子と協調して働き、系譜仕様や組織パターニングを形作るエンハンサーネットワークおよびクロマチン状態を調節します。その活性は、心筋細胞の分化、電気的結合、構造的な形態形成を司る転写制御経路に組み込まれています。TBX5 の発現量（用量）や調節機能の変化は先天性の心臓および四肢の奇形と関連しており、in vivo および幹細胞ベースの系における発生調節異常のモデル化において重要な中核因子となっています。

TBX5 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tbx5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBX5 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tbx5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTbx5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBX5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTbx5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBX5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTbx5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBX5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。