TBX4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405242-ACT

TBX4はT-boxファミリーの転写因子をコードしており、保存性の高いT-boxドメインを介してDNAに結合し、発生における遺伝子発現プログラムを制御します。ヒトの生物学においてTBX4は後肢の形態形成と間葉系細胞の分化を駆動する重要な因子であり、パターニングおよび組織の特異化の過程でFGF、WNT、BMP、SHHシグナル伝達と交差する転写ネットワークを統括します。TBX4の量（発現量）や調節活性の変化は先天性四肢奇形や小児の肺血管疾患と関連づけられており、発生および器官形成経路における役割を反映しています。核内の調節因子として、TBX4は系譜決定、転写回路、エンハンサー—プロモーター制御に及ぼす影響の観点から、しばしば研究対象となっています。

TBX4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBX4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBX4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBX4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBX4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBX4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBX4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBX4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBX4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBX4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。