TBX15 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405994-ACT

TBX15 umano codifica un fattore di trascrizione della famiglia T-box che regola programmi di patterning dello sviluppo e la specificazione delle linee mesenchimali, con ruoli di rilievo nella biologia del tessuto scheletrico e adiposo. Legandosi ai motivi T-box e coordinando reti trascrizionali, TBX15 influenza lo stato della cromatina e i programmi di espressione genica a valle che determinano le scelte di destino cellulare, la differenziazione e la morfogenesi dei tessuti. Alterazioni dell’espressione di TBX15 e varianti regolatorie sono state associate alla distribuzione del tessuto adiposo e a fenotipi metabolici, e un’attività di TBX15 disregolata è oggetto di studio in contesti che includono anomalie dello sviluppo e riprogrammazione trascrizionale correlata al cancro. Queste caratteristiche rendono TBX15 un nodo utile per analizzare il controllo trascrizionale dell’impegno di linea e la regolazione genica specifica di tessuto.

TBX15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TBX15 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TBX15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TBX15 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TBX15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TBX15. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TBX15 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TBX15 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TBX15 nelle cellule tumorali con espressione di TBX15 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.