TBL1Y Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404389-ACT

O TBL1Y codifica uma proteína tipo beta de transducina ligada ao cromossoma Y, que atua como componente do maquinário correpressor transcricional NCoR/SMRT, ajudando a acoplar programas de repressão e ativação associados à cromatina à regulação génica dependente de sinais. Por meio de interações com enzimas que modificam histonas e fatores de transcrição, complexos relacionados ao TBL1Y influenciam a transcrição pela RNA polimerase II, a sinalização de recetores nucleares e a dinâmica de expressão de genes do desenvolvimento. Embora seja menos caracterizado do que o seu parálogo TBL1XR1, as proteínas da família TBL1 estão amplamente implicadas em vias que governam decisões de destino celular, sinalização inflamatória e reprogramação oncogénica da transcrição. O estudo do TBL1Y apoia investigações sobre redes regulatórias ligadas ao sexo, a biologia de corre-guladores transcricionais e a desregulação da expressão génica dependente da cromatina em contextos relevantes para doenças.

TBL1Y O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TBL1Y sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TBL1Y O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TBL1Y em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TBL1Y, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TBL1Y. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TBL1Y nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TBL1Y no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TBL1Y em células tumorais com expressão de TBL1Y silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.