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TAZ双切口酶质粒(m) | sc-430168-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TAZ双切口酶质粒(m2) | sc-430168-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Wwtr1 基因编码转录共激活因子 TAZ。TAZ 是 Hippo 通路的关键下游效应因子,能够整合机械信号、细胞密度以及细胞骨架动力学等线索,从而调控控制细胞增殖、生存与分化的基因程序。TAZ 通过与 TEAD 家族转录因子相互作用,协同调节上皮–间质可塑性、干/祖细胞行为以及器官大小控制。TAZ 活性失调与组织稳态改变及类致癌的转录状态相关,因此 Wwtr1 常被用作研究生长控制网络的关键节点。在小鼠研究体系中,对 Wwtr1/TAZ 的扰动常用于解析发育信号通路的串扰以及情境依赖性的转录调控机制。
TAZ 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Wwtr1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Wwtr1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Wwtr1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Wwtr1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。