TARDBP Double Nickaseプラスミド (h): sc-401890-NIC

TARDBP（TDP-43）は、ほぼ全ての組織で発現するRNA/DNA結合タンパク質であり、pre-mRNAスプライシング、転写産物の安定性、輸送など、RNA代謝の複数の段階を調節し、転写制御にも関与します。主に核内に局在しますが、細胞質へシャトルすることもでき、細胞ストレス時にはストレス顆粒にリクルートされるため、プロテオスタシスやRNA品質管理過程とも関連づけられています。TARDBP依存的なRNAプロセシングは、スプライシングプログラムを形成し、長い神経細胞転写産物における異常なクリプティックエクソンの取り込みを防ぐことで、神経細胞の恒常性維持に寄与します。TDP-43の機能異常、誤局在、凝集は、ALSや前頭側頭葉変性症（前頭側頭葉変性：FTLD）を含む神経変性疾患の病態機構と強く関連しており、RNA結合タンパク質の機能不全というより広い文脈でも研究されています。

TARDBP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TARDBP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TARDBP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TARDBPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TARDBPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。