TARDBP Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-433014-ACT

O gene **Tardbp** em camundongos codifica a **TARDBP (TDP-43)**, uma proteína multifuncional de ligação a RNA e DNA que regula a transcrição, o splicing de pré-mRNA, a estabilidade e o transporte de mRNA, e a dinâmica de grânulos de estresse. A TARDBP coordena programas de metabolismo de RNA que influenciam a diferenciação neuronal, a função sináptica e a proteostase, e participa de um feedback autorregulatório que mantém uma homeostase de expressão rigidamente controlada. A perturbação da localização da TARDBP ou da sua atividade de ligação a RNA desorganiza a montagem de ribonucleoproteínas e pode alterar a expressão de genes envolvidos na organização do citoesqueleto e na função mitocondrial. Alterações na biologia da TARDBP estão fortemente associadas a mecanismos ligados à neurodegeneração, incluindo mudanças no processamento de RNA e em vias de agregação proteica, tornando-a um nó central para modelar fenótipos celulares relevantes para doenças em sistemas de camundongo.

TARDBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tardbp sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TARDBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tardbp em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tardbp, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TARDBP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tardbp nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TARDBP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TARDBP em células tumorais com expressão de Tardbp silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.