Talin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401342-ACT

ヒトTLN1はタリンをコードしており、タリンはβインテグリンの細胞質尾部をF-アクチンに連結する細胞骨格アダプターとして機能し、インテグリンの活性化、焦点接着（フォーカルアドヒージョン）の形成、ならびにメカノトランスダクション（力学刺激のシグナル変換）を促進します。タリンは、焦点接着キナーゼ（FAK）との協調、Srcファミリーシグナル伝達、Rho GTPase依存的なアクチン再構築、PI3K–AKT経路などを通じて、細胞外マトリックスからの刺激に応答した細胞接着、伸展、遊走、生存の制御に寄与します。TLN1の発現変動やタリン依存的な接着ダイナミクスの変化は、浸潤や転移挙動の異常に加え、インテグリンシグナルに依存する止血や免疫細胞トラフィッキングの障害とも関連づけられています。これらの特性から、TLN1は接着依存的シグナルネットワークおよび力に感受性のある細胞–マトリックス相互作用を研究するうえで、広く用いられる重要因子となっています。

Talin-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TLN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Talin-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TLN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTLN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Talin-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTLN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTalin-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTLN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTalin-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。