TAF II p250 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402218-ACT

TAF1 codifica a TAF II p250, uma subunidade central do complexo TFIID que nucleia a montagem do complexo de pré-iniciação da RNA polimerase II e dá suporte ao reconhecimento de promotores por meio de interações com a TBP e outras TAFs. Como arcabouço central da transcrição basal, a TAF1 integra sinais regulatórios que moldam programas globais de expressão gênica que controlam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e o controle transcricional associado à cromatina. A perturbação da função de TAF1 está ligada a redes transcricionais desreguladas e tem sido implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, refletindo sua ampla necessidade na regulação de genes neuronais. Essas propriedades tornam a TAF1 um nó-chave para o estudo da iniciação da transcrição, da arquitetura de promotores e de estados de expressão gênica relevantes para doenças em células humanas.

TAF II p250 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAF II p250 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAF II p250. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAF II p250 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAF II p250 em células tumorais com expressão de TAF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.