TAB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401596-ACT

A TAB2 humana (proteína 2 ligadora de TAK1/MAP3K7) atua como um adaptador que conecta a sinalização dependente de poliubiquitina à ativação de MAP3K7/TAK1, integrando estímulos das vias do receptor de TNF e dos receptores Toll/IL-1. Por meio de interações com intermediários ubiquitinados e com TAB1/TAB3, a TAB2 promove a sinalização a jusante de NF-κB e MAPK, moldando a expressão de genes inflamatórios, respostas ao estresse e decisões de sobrevivência celular. A atividade de TAB2 contribui para a regulação da ativação da imunidade inata e de programas transcricionais induzidos por citocinas. A desregulação da sinalização associada à TAB2 tem sido implicada em fenótipos inflamatórios e em contextos de sinalização relacionados ao câncer, nos quais o acionamento aberrante das vias NF-κB/MAPK sustenta estados celulares patogênicos.

TAB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAB2 em células tumorais com expressão de TAB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.