TAB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402049-ACT

A TAB1 humana (TAK1-binding protein 1) é um fator adaptador/regulador que se liga à MAP3K7/TAK1 e facilita a propagação de sinais provenientes de receptores pró-inflamatórios e responsivos ao estresse para cascatas de quinases a jusante. Por meio de seu papel na ativação de TAK1, a TAB1 contribui para a sinalização de NF-κB e MAPK, influenciando programas transcricionais que controlam a produção de citocinas, as respostas imunes inatas, a sobrevivência celular e a apoptose. O ajuste fino de vias dependentes de TAB1 impacta as respostas celulares a sinais do receptor de TNF e de receptores Toll/IL-1, vinculando-a a processos associados à inflamação e a respostas ao estresse tecidual. A sinalização desregulada TAB1–TAK1 tem sido estudada em contextos de doenças inflamatórias crônicas, inflamação associada a tumores e outras patologias nas quais a atividade de NF-κB/MAPK está alterada.

TAB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAB1 em células tumorais com expressão de TAB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.