T2R38 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402279

Panoramica

TAS2R38 codifica il recettore del gusto amaro T2R38, un GPCR di classe A che rileva composti contenenti tiourea come PTC/PROP e si accoppia a una segnalazione associata alla gustducina per modulare i secondi messaggeri intracellulari, incluso il flusso di Ca²⁺, nelle cellule chemosensoriali. Oltre alla percezione del gusto nella cavità orale, T2R38 è espresso in epiteli extraorali, dove la segnalazione dei recettori dell’amaro contribuisce alla sorveglianza chemosensoriale e alla regolazione delle risposte epiteliali. Aplotipi comuni di TAS2R38 alterano la sensibilità del recettore e sono stati studiati come determinanti genetici della percezione dell’amaro e della variabilità dei comportamenti guidati da stimoli chemosensoriali. In quanto recettore sensoriale accoppiato a GPCR, T2R38 rappresenta un modello maneggevole per analizzare la segnalazione recettoriale, il controllo dell’espressione e le relazioni genotipo–fenotipo in sistemi cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO T2R38 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TAS2R38 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TAS2R38 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TAS2R38 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina T2R38.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TAS2R38 per lo studio della segnalazione di T2R38, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TAS2R38 critici per la funzione di T2R38
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TAS2R38 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal T2R38 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal T2R38 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TAS2R38. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal T2R38 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR T2R38 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TAS2R38 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TAS2R38 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.