Tβ-10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422496

概要

Tmsb10は、Gアクチン／Fアクチンの平衡を調節し、迅速な細胞骨格リモデリングを支える小型のアクチン隔離タンパク質であるサイモシンβ-10（Tβ-10）をコードします。アクチン重合ダイナミクスに影響を与えることで、Tβ-10は細胞形態の制御、遊走、接着、細胞質分裂などの過程に寄与し、運動性やストレス応答に関連するシグナル伝達プログラムにも下流で影響を及ぼします。TMSB10／Tβ-10の発現変化は複数の病的状況で報告されており、しばしば増殖能や浸潤性の変化と相関します。そのためマウス系では、Tmsb10はアクチン駆動性の細胞表現型と、形質転換に関連する経路との関係を解析するための有用な切り口となります。

Tβ-10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTmsb10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tmsb10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tmsb10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tβ-10タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tβ-10シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tmsb10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tβ-10の機能に不可欠なTmsb10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tmsb10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tβ-10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTβ-10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tmsb10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tβ-10 HDRプラスミド（m）および Tβ-10 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTmsb10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTmsb10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。