SYP/Synaptophysin Plasmide Double Nickase (h): sc-400487-NIC

SYP codifica la sinaptofisina, una glicoproteina integrale di membrana altamente abbondante delle vescicole sinaptiche, che supporta la biogenesi delle vescicole presinaptiche, il loro traffico e il rilascio di neurotrasmettitori dipendente da Ca²⁺. La sinaptofisina partecipa al riciclo vescicolare e all’accoppiamento endocitosi/esocitosi attraverso interazioni con proteine vescicolari come sinaptobrevina/VAMP2, collegandola alla trasmissione sinaptica e all’attività delle reti neuronali. Poiché SYP è ampiamente utilizzato come marcatore della densità sinaptica e dell’integrità presinaptica, alterazioni della sua espressione o distribuzione vengono frequentemente esaminate in studi sulla neurodegenerazione, sui disturbi del neurosviluppo e sulla disfunzione sinaptica. La sua localizzazione associata alle vescicole lo rende inoltre rilevante per indagini sulla differenziazione neuronale, sulla plasticità e sui cambiamenti a livello di circuito guidati da vie patogenetiche associate alla malattia.

SYP/Synaptophysin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SYP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SYP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SYP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SYP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.