syntenin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416825-ACT

SDCBP codifica a sintenina-1, um adaptador contendo domínio PDZ que se liga a sindecanas e a diversos recetores de membrana para organizar complexos de sinalização na membrana plasmática e em compartimentos endossomais. A sintenina-1 regula o tráfego endocítico, a biogénese de exossomas e a dinâmica do citoesqueleto, influenciando a adesão celular, a migração e a comunicação intercelular. Por meio de interações com vias como FAK/Src, PI3K–AKT e sinalização associada a integrinas, ajuda a coordenar a reciclagem de recetores e respostas transcricionais a jusante. A expressão alterada de SDCBP e a sinalização vesicular dependente de sintenina-1 têm sido associadas à progressão tumoral, a fenótipos relacionados com metástase e à modulação do microambiente inflamatório, sustentando a sua relevância em estudos mecanísticos da biologia das doenças.

syntenin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SDCBP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

syntenin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SDCBP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SDCBP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de syntenin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SDCBP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de syntenin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via syntenin-1 em células tumorais com expressão de SDCBP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.