Syne-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402804

概要

SYNE1はSyne-1（nesprin-1）をコードしており、Syne-1はスペクトリンリピートを含む大型の足場タンパク質としてLINC複合体の構成要素となり、SUNタンパク質、アクチン、および中間径フィラメントとの相互作用を介して核と細胞骨格を連結します。Syne-1は核の位置決め、メカノトランスダクション、細胞骨格の組織化を制御することで、細胞移動、極性、組織構築などの過程に影響を及ぼします。SYNE1の機能破綻は、常染色体劣性小脳性運動失調を含む神経発達・神経変性関連の表現型と関連付けられており、また、核‐細胞骨格カップリングの変化がゲノム安定性や細胞挙動に影響し得ることから、がんゲノム研究でも報告されています。これらの特徴により、SYNE1はヒトモデル系において、核膜の生物学、力の伝達、および疾患関連の細胞表現型を検討するうえで重要な標的となります。

Syne-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSYNE1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SYNE1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SYNE1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Syne-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Syne-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SYNE1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Syne-1の機能に不可欠なSYNE1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SYNE1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Syne-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSyne-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SYNE1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Syne-1 HDRプラスミド（h）および Syne-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSYNE1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSYNE1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。