Synaptojanin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423241-ACT

Synj2 de camundongo codifica a sinaptojanina 2, uma 5-fosfatase de fosfoinositídeos que regula a sinalização de fosfatidilinositol ao desfosforilar PIP2 e lipídios relacionados em membranas endocíticas. Ao controlar a endocitose mediada por clatrina, a internalização de receptores e a remodelação de membrana dependente de actina, a sinaptojanina 2 ajuda a coordenar o tráfego vesicular e a dinâmica de sinalização intracelular. A atividade da família das sinaptojaninas está intimamente ligada à reciclagem de vesículas sinápticas e a uma homeostase mais ampla das membranas neuronais, e alterações no metabolismo de fosfoinositídeos têm sido implicadas em mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas. Synj2 também é estudado em contextos nos quais o fluxo endocítico e o turnover de fosfoinositídeos influenciam a sinalização por fatores de crescimento e fenótipos de migração celular.

Synaptojanin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Synj2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Synaptojanin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Synj2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Synj2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Synaptojanin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Synj2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Synaptojanin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Synaptojanin 2 em células tumorais com expressão de Synj2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.