Plasmide CRISPR d'Activation (h) Synaptojanin 2: sc-411221-ACT

SYNJ2 code la synaptojanine 2, une phosphatase des polyphosphoinositides qui hydrolyse le PI(4,5)P2 et des phosphoinositides apparentés afin de réguler l’identité membranaire et le trafic intracellulaire. En contrôlant l’endocytose médiée par la clathrine, le recyclage endosomal et la dynamique du cytosquelette d’actine, la synaptojanine 2 contribue à coordonner l’internalisation des récepteurs et l’intensité de la signalisation à la membrane plasmique. Son activité relie le renouvellement des phosphoinositides à des voies régissant la migration cellulaire, l’adhérence et la dynamique vésiculaire, des processus fréquemment étudiés en biologie du cancer et en neurobiologie. Une expression ou une fonction altérée de SYNJ2 a été associée à un trafic des récepteurs dérégulé et à des phénotypes invasifs, ce qui confirme son intérêt pour l’étude du remodelage cellulaire dépendant de la signalisation.

Synaptojanin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SYNJ2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Synaptojanin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SYNJ2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SYNJ2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Synaptojanin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SYNJ2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Synaptojanin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Synaptojanin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SYNJ2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.