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Synaptogyrin-2CRISPR激活质粒(h) | sc-404687-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Synaptogyrin-2CRISPR激活质粒(h2) | sc-404687-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
人类 SYNGR2 基因编码突触囊泡蛋白 synaptogyrin-2,这是一种四跨膜的突触囊泡膜蛋白,参与突触前结构组织以及活动依赖性的神经递质释放。Synaptogyrin 家族成员通过影响突触囊泡在突触传递程序中的组成与动态变化,促进囊泡的生物发生、运输与回收。基于这些作用,SYNGR2 的表达与调控与神经元兴奋性、突触可塑性和神经回路功能研究密切相关;在囊泡循环和突触前信号传导受扰的情况下,它也可能与神经精神疾病和神经发育性疾病的机制有关。在神经元与神经分泌模型中,检测 SYNGR2 依赖的囊泡标志物变化、释放概率以及内吞动力学,可帮助将基因调控与细胞表型联系起来。
Synaptogyrin-2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SYNGR2的表达。
Synaptogyrin-2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SYNGR2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SYNGR2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Synaptogyrin-2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SYNGR2位点,并能够研究内源性位点上依赖于Synaptogyrin-2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SYNGR2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Synaptogyrin-2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。