Svs5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423227

Übersicht

Svs5 kodiert das Sekretprotein 5 der Samenbläschen (Svs5), ein Protein des männlichen Reproduktionstrakts der Maus, das mit Sekreten der akzessorischen Geschlechtsdrüsen und dem postejakulatorischen Milieu assoziiert ist. Proteine der Svs-Familie werden mit Prozessen wie der Koagulation des Spermas, dem Schutz von Spermien und der Modulation der Spermienfunktion in Verbindung gebracht – unter anderem durch Interaktionen mit extrazellulären Proteinnetzwerken und durch proteolytisches Remodeling. Obwohl Svs5 weniger gut charakterisiert ist als einige verwandte Samenbläschenproteine, macht sein Expressionsprofil es relevant für Studien zu androgenregulierten Genprogrammen, zur Reproduktionsphysiologie und zu Faktoren, die männliche Fertilitätsphänotypen beeinflussen. Eine veränderte Regulation sekretorischer Proteine akzessorischer Drüsen kann in Mausmodellen Aufschluss über Mechanismen geben, die Subfertilität und die Biologie des Reproduktionstrakts zugrunde liegen.

Das Svs5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Svs5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Svs5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Svs5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Svs5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Svs5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Svs5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Svs5-Exone abzielen, die für die Svs5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Svs5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Svs5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Svs5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Svs5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Svs5 HDR-Plasmid (m) und Svs5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Svs5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Svs5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.