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SV2CCRISPR激活质粒(h) | sc-402877-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
SV2CCRISPR激活质粒(h2) | sc-402877-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
突触小泡糖蛋白 2C(SV2C)是一种多跨膜蛋白,定位于突触小泡及相关的分泌性细胞器,在其中参与调控小泡运输、预备(priming)以及与刺激耦联的神经递质释放。在神经元中,SV2 家族蛋白与核心胞吐机制相互作用,影响突触小泡循环与神经传递效率,从而对环路层面的信号传导产生影响。人类 SV2C 在儿茶酚胺能通路中富集,并与多巴胺能突触功能相关,因此在研究神经元易损性与突触功能障碍方面具有重要意义。遗传学与功能性数据集显示,SV2C 表达或活性改变与神经退行性及神经精神表型相关,支持其作为突触生物学研究中的关键机制节点。
SV2C CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SV2C的表达。
SV2C CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SV2C基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SV2C转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SV2C表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SV2C位点,并能够研究内源性位点上依赖于SV2C的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SV2C表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SV2C通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。