SUZ12 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401551-LAC

Il gene umano **SUZ12** codifica una componente centrale del **Complesso Repressivo Polycomb 2 (PRC2)** che coopera con **EZH2** ed **EED** per instaurare e mantenere la repressione trascrizionale tramite la trimetilazione di **H3K27**. Regolando la compattazione della cromatina e programmi di espressione genica specifici di linea, SUZ12 influenza vie di sviluppo, decisioni di destino cellulare e controllo del ciclo cellulare. Un’attività PRC2 deregolata e l’alterazione di SUZ12 sono implicate nel rimodellamento epigenetico osservato in molteplici contesti tumorali e in fenotipi neuroevolutivi, rendendo SUZ12 un nodo chiave per lo studio della regolazione genica dipendente dalla cromatina. L’interrogazione funzionale di SUZ12 sostiene la ricerca sul silenziamento mediato da Polycomb, sul controllo enhancer–promotore e sul crosstalk epigenetico con la metilazione del DNA e l’acetilazione degli istoni.

Le particelle di attivazione lentivirale SUZ12 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SUZ12 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SUZ12 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SUZ12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SUZ12. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SUZ12 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.