SUV420H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404626

概要

KMT5C は、リシンメチルトランスフェラーゼである SUV420H2 をコードしており、これはヒストン H4 のリシン 20（H4K20）のトリメチル化（H4K20me3）を触媒するクロマチン修飾酵素です。この修飾はヘテロクロマチンに豊富に存在し、高次クロマチンの凝縮、複製タイミングの制御、ならびに DNA 修復経路の選択制御を介したゲノム安定性の維持を支えます。SUV420H2 の活性は、エピジェネティックなサイレンシング・プログラムや細胞周期に連動したクロマチン再構成と連携し、反復配列要素や系譜特異的遺伝子座における転写抑制に影響を与えます。H4K20 のメチル化パターンの破綻や SUV420H2 発現の変化は、がんやその他のゲノム不安定性に関わる状況で観察される異常なクロマチン状態と関連づけられており、そのため KMT5C はエピジェネティクスに焦点を当てた機序研究における有用なターゲット（ノード）となります。

SUV420H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKMT5C遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KMT5C内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KMT5Cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SUV420H2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SUV420H2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KMT5C欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SUV420H2の機能に不可欠なKMT5Cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KMT5Cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SUV420H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSUV420H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KMT5C遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SUV420H2 HDRプラスミド（h）および SUV420H2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKMT5Cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKMT5C標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。