SUMO-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400788-ACT

O gene humano **SUMO3** codifica a SUMO-3, um modificador do tipo ubiquitina que é conjugado covalentemente a proteínas-alvo para regular sua localização, estabilidade e redes de interação. A SUMOilação influencia processos nucleares centrais, incluindo sinalização e reparo de danos ao DNA, organização da cromatina, regulação transcricional, processamento de RNA e progressão do ciclo celular, e também se conecta a vias de resposta ao estresse por meio de modificações dinâmicas e reversíveis de proteínas reguladoras-chave. A SUMO-3 é enriquecida na formação de cadeias poli-SUMO e pode promover a degradação de substratos modificados dependente de ligases de ubiquitina direcionadas por SUMO (STUbL), conectando a SUMOilação à proteostase. A desregulação da expressão de **SUMO3** ou da atividade da via de SUMO tem sido associada a alterações na manutenção do genoma e em programas transcricionais observados no câncer e na neurodegeneração, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos de sinalização nuclear.

SUMO-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SUMO3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SUMO-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SUMO3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SUMO3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SUMO-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SUMO3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SUMO-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SUMO-3 em células tumorais com expressão de SUMO3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.