STI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423190

概要

Stip1は、ストレス誘導性リン酸化タンパク質1（STI1、HOPとも呼ばれる）をコードしており、HSP70とHSP90を橋渡しして、タンパク質のフォールディング、成熟、ならびにシグナル伝達タンパク質の安定化を協調的に制御するコシャペロンです。マウス細胞においてSTI1はプロテオスタシスを維持し、熱ショックや酸化ストレス、その他のタンパク質毒性ストレスに対する細胞応答に寄与することで、タンパク質品質管理とターンオーバーに影響を与えます。シャペロンのクライアントタンパク質の処理を調節することにより、STI1は受容体・キナーゼシグナル、ミトコンドリア機能、細胞骨格ダイナミクスを制御する経路の形成に関与し得ます。STI1を含むシャペロンネットワークの破綻は、プロテオームの安定性低下やストレスシグナルの変調が共通して見られる神経変性、がん生物学、炎症性ストレス応答のモデルと関連しています。

STI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるStip1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Stip1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Stip1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、STI1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、STI1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Stip1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• STI1の機能に不可欠なStip1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Stip1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• STI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSTI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Stip1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  STI1 HDRプラスミド（m）および STI1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはStip1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のStip1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。