Plásmido CRISPR de Activación (h) STELLA: sc-403261-ACT

DPPA3 (STELLA) es un factor asociado a las células germinales y al embrión temprano, implicado en la regulación epigenética durante el desarrollo preimplantacional, incluida la conservación de los estados de metilación del ADN y la protección de las improntas genómicas. En células humanas, STELLA se vincula con la organización de la cromatina y con programas transcripcionales que sustentan las transiciones de pluripotencia, la especificación de la línea germinal y la estabilidad del genoma en contextos tempranos del desarrollo. Su actividad se ha asociado con la modulación de vías dependientes de la metilación del ADN y con la coordinación de redes génicas relacionadas con la reprogramación. Se han descrito patrones de expresión desregulada de DPPA3 en estudios sobre infertilidad, anomalías del desarrollo y remodelación epigenética asociada al cáncer, lo que la hace relevante para investigaciones mecanísticas del control del estado celular.

STELLA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DPPA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

STELLA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DPPA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DPPA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de STELLA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DPPA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de STELLA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía STELLA en células tumorales con expresión de DPPA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.