Stat6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423180-ACT

O Stat6 de camundongo (transdutor de sinal e ativador de transcrição 6) é um fator de transcrição responsivo a citocinas, ativado a jusante da sinalização dos receptores de IL-4 e IL-13 por meio de quinases JAK, levando à fosforilação em tirosina, dimerização e translocação nuclear. O STAT6 conduz programas gênicos associados à polarização Th2, ativação alternativa (tipo M2) de macrófagos, troca de classe em células B, produção de muco e remodelamento tecidual. Por meio da regulação de quimiocinas, de genes associados a imunoglobulinas e de vias de diferenciação epitelial, o Stat6 contribui para inflamação alérgica e hiper-reatividade das vias aéreas, sendo frequentemente estudado no contexto de asma e de modelos de doenças atópicas. Sua atividade também se cruza com a imunobiologia do microambiente tumoral e com redes transcricionais relacionadas à fibrose, tornando o Stat6 um nó útil para dissecar vias em pesquisas de imunologia e inflamação.

Stat6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Stat6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Stat6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Stat6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Stat6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Stat6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Stat6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Stat6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Stat6 em células tumorais com expressão de Stat6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.