St3Gal-III Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406298-ACT

ST3GAL3 codifica a sialiltransferase humana St3Gal-III, uma enzima residente no aparelho de Golgi que catalisa a transferência de ácido siálico em uma ligação α2,3 para glicoconjugados que contêm galactose. Ao moldar os padrões de sialilação terminal em glicanos N- e O-ligados e em glicolipídios, a St3Gal-III influencia o tráfego de glicoproteínas, o reconhecimento célula–célula, a dinâmica de sinalização de receptores e epítopos de carboidratos com função imunomoduladora. Essa atividade conecta a ST3GAL3 a processos mais amplos de glicosilação e da via secretória que regulam adesão e migração por meio da remodelação do glicoma da superfície celular. Alterações genéticas ou regulatórias em ST3GAL3 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a assinaturas de glicanos alteradas relevantes para a biologia de doenças, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de vias dependentes de sialilação.

St3Gal-III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ST3GAL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

St3Gal-III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ST3GAL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ST3GAL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de St3Gal-III. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ST3GAL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de St3Gal-III no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via St3Gal-III em células tumorais com expressão de ST3GAL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.