Plásmido CRISPR de Activación (m) SRPK1: sc-423158-ACT

El gen Srpk1 de ratón codifica la quinasa 1 específica de proteínas ricas en serina/arginina (SRPK1), un regulador clave del empalme (splicing) del pre-ARNm mediante la fosforilación de factores de empalme SR y la modulación del ensamblaje del espliceosoma. SRPK1 influye en el procesamiento del ARNm, en el transporte nucleocitoplasmático de reguladores del empalme y en programas posteriores de isoformas de transcritos que afectan al control del ciclo celular, las respuestas al estrés y la diferenciación. La alteración de la actividad de SRPK1 se ha asociado con patrones desregulados de empalme de ARN observados en contextos de biología del cáncer, neurodegeneración y señalización inflamatoria. Estas propiedades hacen de SRPK1 un nodo útil para investigar la remodelación de vías dependientes del empalme y las redes de expresión génica en sistemas de mamíferos.

SRPK1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Srpk1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SRPK1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Srpk1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Srpk1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SRPK1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Srpk1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SRPK1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SRPK1 en células tumorales con expresión de Srpk1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.