Plásmido CRISPR de Activación (h) SRPK1: sc-402855-ACT

SRPK1 (quinasa 1 específica de proteínas ricas en serina/arginina) es una quinasa humana que fosforila factores de empalme SR para regular el ensamblaje del espliceosoma, el empalme alternativo del pre-ARNm y la exportación del ARNm. Al acoplar la localización dependiente de la fosforilación de reguladores del empalme con los resultados transcripcionales, SRPK1 ayuda a configurar programas de isoformas que influyen en la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la plasticidad de las redes de señalización. La actividad desregulada de SRPK1 y los patrones de empalme se han vinculado con isoformas transcriptómicas angiogénicas y oncogénicas alteradas en la biología del cáncer, así como con defectos más amplios en el procesamiento de ARN observados en diversos contextos de enfermedades neurológicas y metabólicas.

SRPK1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SRPK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SRPK1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SRPK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SRPK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SRPK1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SRPK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SRPK1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SRPK1 en células tumorales con expresión de SRPK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.