SRp30c Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403790-ACT

SRSF9 codifica o fator de splicing humano rico em serina/arginina SRp30c, uma proteína de ligação ao RNA que regula o splicing constitutivo e alternativo do pré‑mRNA e contribui para a definição de éxons. O SRp30c influencia o conjunto de isoformas transcricionais geradas e decisões de processamento de RNA que se cruzam com a montagem do espliceossomo, a exportação de mRNA e programas mais amplos de expressão gênica. Alterações na atividade ou na expressão de reguladores de splicing da família SR podem deslocar o equilíbrio de isoformas em redes relacionadas ao ciclo celular, à resposta ao estresse e à diferenciação, conectando a desregulação do splicing a estados transcricionais associados a doenças. Consequentemente, o SRSF9 é comumente estudado por seu papel no controle pós‑transcricional e no mapeamento de vias regulatórias dependentes de splicing em células humanas.

SRp30c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SRSF9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SRp30c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SRSF9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SRSF9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SRp30c. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SRSF9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SRp30c no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SRp30c em células tumorais com expressão de SRSF9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.