SR-4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403373-NIC

HTR4はヒトの5-ヒドロキシトリプタミン受容体4（SR-4）をコードする遺伝子で、主にGsに共役するGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。これによりアデニル酸シクラーゼが刺激され、cAMPが増加し、PKA依存性およびEPAC依存性のシグナル伝達プログラムが活性化されます。これらの経路を介してSR-4は、神経伝達物質の放出、神経細胞の興奮性、上皮の分泌や運動（蠕動）過程を調節し、セロトニン作動性のシグナルを下流のリン酸化ネットワークや遺伝子発現と統合します。HTR4の活性は、シナプス可塑性や神経—消化管生理を形作る、より広範なセロトニン作動性シグナルおよび環状ヌクレオチド（cAMP）シグナル回路とも連動しています。HTR4に結び付いたシグナル伝達の破綻は、セロトニン作動性トーンや消化管運動の調節が関与する疾患の文脈で検討されており、経路に焦点を当てた研究における機構的な結節点としての重要性が示唆されています。

SR-4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HTR4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HTR4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HTR4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HTR4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。