SR-2B Plasmide Double Nickase (h): sc-402574-NIC

HTR2B codifica il recettore umano della 5-idrossitriptamina 2B (SR-2B), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, il turnover dei fosfati dell’inositolo, la mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare e la conseguente attivazione delle vie PKC/MAPK. SR-2B può anche attivare una segnalazione dipendente da β-arrestina e la desensibilizzazione del recettore, collegando gli stimoli serotoninergici a programmi trascrizionali che regolano proliferazione cellulare, migrazione e rimodellamento della matrice extracellulare. L’attività di HTR2B è rilevante per la biologia neurovascolare e per la segnalazione serotoninergica periferica, con associazioni riportate a fenotipi cardiopolmonari e neuropsichiatrici in studi genetici e funzionali. Nella ricerca biomedica, HTR2B è frequentemente studiato come modulatore del cross-talk recettoriale e del comportamento delle reti di GPCR in sistemi in cui la serotonina influenza risposte di sviluppo, infiammatorie o di rimodellamento tissutale.

SR-2B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HTR2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HTR2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HTR2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HTR2B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.