Squalene epoxidase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402870-ACT

SQLEはスクアレンエポキシダーゼをコードしており、フラビン依存性モノオキシゲナーゼとしてスクアレンを2,3-オキシドスクアレンへとエポキシ化する反応を触媒します。これはステロール生合成における不可逆的で速度に影響する段階です。この小胞体（ER）関連酵素はコレステロールを含む各種ステロールの量の制御に関与し、SQLE活性は膜組成、脂質ラフトの動態、ならびにステロイド生成前駆体の利用可能性と結び付いています。SQLEは細胞内の脂質状態によって調節され、コレステロール恒常性とより広範な脂質代謝を協調的に制御するSREBP駆動の代謝プログラムとも交差します。SQLE発現の破綻は、増殖性・炎症性状態など、複数の疾患関連状況で観察されるステロールフラックスの変化や代謝リプログラミングと関連付けられています。

Squalene epoxidase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SQLEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Squalene epoxidase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SQLE 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSQLE転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Squalene epoxidaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSQLE遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSqualene epoxidase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSQLE発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSqualene epoxidase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。