SPT6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406219-ACT

O gene humano **SUPT6H** codifica a **SPT6**, um fator conservado de elongação da transcrição e associado à cromatina que se liga ao **CTD** fosforilado da **RNA polimerase II** e coordena a remontagem de nucleossomos durante a transcrição ativa. A SPT6 atua com fatores como **IWS1/ALYREF** para acoplar a elongação ao processamento co-transcricional de mRNA, incluindo splicing e exportação de RNA, moldando assim a fidelidade transcricional e a estabilidade do genoma. Por meio da regulação da estrutura da cromatina e da dinâmica de elongação, **SUPT6H** influencia programas amplos de expressão gênica ligados à identidade celular, proliferação e respostas ao estresse. A desregulação do controle transcricional dependente de SPT6 tem sido implicada em sinalização oncogênica aberrante e em estados de diferenciação alterados, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de dependência transcricional e vulnerabilidade epigenética.

SPT6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SUPT6H sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SPT6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SUPT6H em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SUPT6H, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SPT6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SUPT6H nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SPT6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SPT6 em células tumorais com expressão de SUPT6H silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.