SPT16 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401268-ACT

Il gene umano **SUPT16H** codifica **SPT16**, una subunità centrale del complesso chaperone degli istoni **FACT** (Facilitates Chromatin Transcription), che riorganizza i nucleosomi per supportare l’elongazione della RNA polimerasi II. Coordinando la dinamica di **H2A–H2B** e l’accessibilità della cromatina, SPT16 contribuisce a regolare i programmi trascrizionali, il rimodellamento della cromatina associato alla replicazione e le risposte al danno al DNA. Il controllo della cromatina dipendente da FACT collega SUPT16H a reti di segnalazione proliferativa e a vie della stabilità del genoma, rendendolo rilevante per lo studio della regolazione epigenetica e dei meccanismi che contribuiscono alla trascrizione oncogenica e all’adattamento allo stress. Un’attività alterata di FACT è stata associata a un’espressione genica deregolata e a stati della cromatina osservati in molteplici contesti legati al cancro, a supporto del suo impiego come nodo funzionale nella ricerca su cromatina e trascrizione.

SPT16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SUPT16H senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SPT16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SUPT16H nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SUPT16H, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SPT16. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SUPT16H nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SPT16 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SPT16 nelle cellule tumorali con espressione di SUPT16H silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.