Spi-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402613-ACT

SPIB codifica Spi-B, um fator de transcrição da família ETS com papéis de destaque na especificação de linhagens hematopoéticas e na maturação de células imunes, particularmente em programas de células B e de células dendríticas plasmocitoides. Spi-B regula redes gênicas que controlam a sinalização do receptor de antígeno, respostas associadas a interferon e circuitos transcricionais que governam estados de diferenciação e ativação. Alterações na expressão de SPIB ou em sua atividade regulatória têm sido associadas a fenótipos imunes desregulados e foram relatadas em múltiplos contextos de malignidades hematológicas, sustentando seu uso como um nó molecular para estudar o reprograma­mento transcricional. Como regulador de ligação ao DNA, Spi-B oferece um ponto de entrada acessível para investigar a lógica de promotores/realçadores e o controle dependente de cromatina da identidade de linhagem imune.

Spi-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SPIB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Spi-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SPIB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SPIB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Spi-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SPIB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Spi-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Spi-B em células tumorais com expressão de SPIB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.