Plásmido CRISPR de Activación (h) SPAG5: sc-403607-ACT

SPAG5 (antígeno asociado a espermatozoides 5), también conocido como astrina, codifica una proteína asociada a los microtúbulos que se localiza en el huso mitótico y en los cinetocoros, donde contribuye a la alineación cromosómica, la integridad del huso y la segregación fiel de las cromátidas hermanas. SPAG5 participa en procesos centrales del control mitótico, incluida la dinámica de la unión cinetocoro–microtúbulo y la regulación del punto de control del huso, lo que la vincula a la progresión del ciclo celular y a la capacidad proliferativa. La expresión desregulada de SPAG5 se examina con frecuencia en contextos de biología del cáncer, donde el estrés mitótico, la inestabilidad cromosómica y la proliferación alterada son características destacadas. Como resultado, SPAG5 se utiliza ampliamente como diana de investigación en estudios sobre mitosis, estabilidad del genoma y vías que gobiernan la división celular.

SPAG5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SPAG5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SPAG5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SPAG5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SPAG5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SPAG5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SPAG5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SPAG5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SPAG5 en células tumorales con expresión de SPAG5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.