SP140 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-436685-LAC

O gene Sp140 de camundongo codifica a SP140, uma proteína nuclear associada à cromatina, enriquecida em células imunológicas, que ajuda a moldar programas de transcrição ligados à identidade celular e às respostas inflamatórias. A SP140 contém domínios leitores epigenéticos que se localizam na cromatina e influenciam a acessibilidade em loci restritos a determinadas linhagens, integrando-se a vias que regulam a expressão de genes estimulados por interferon, a apresentação de antígenos e a ativação da imunidade inata. Alterações na função de SP140 têm sido associadas à desregulação de sinais inflamatórios e à suscetibilidade a fenótipos de doenças imunomediadas, tornando-a relevante para estudos mecanísticos do controle transcricional em compartimentos mieloides e linfoides. Em modelos murinos, a perturbação de Sp140 é usada para dissecar como a regulação da cromatina se cruza com a sinalização dirigida por citocinas e com a diferenciação de células imunes.

As Partículas de Ativação Lentivirais SP140 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Sp140 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SP140 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Sp140, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SP140. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Sp140 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.