SOCS-6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402344-ACT

ヒトSOCS6（suppressor of cytokine signaling 6）はSOCS-6をコードしており、SOCS-6はSH2ドメインを含むアダプターで、E3ユビキチンリガーゼ複合体の構成要素として機能し、受容体チロシンキナーゼおよびサイトカイン受容体シグナル伝達を抑制します。SOCS-6はSOCSボックスを介して、活性化したシグナル複合体をエロンギンB/C–キュリンからなるユビキチン化機構へ結び付け、タンパク質のターンオーバーや、下流のMAPK/ERK、PI3K–AKT、JAK/STAT経路のダイナミクスに影響を与えます。SOCS6の活性は、増殖因子駆動型シグナルのフィードバック制御を形成することで、細胞増殖・生存・分化の制御に寄与します。SOCS6の発現や機能の破綻は、複数のがんの文脈において、腫瘍性シグナル伝達や腫瘍抑制ネットワークの変調と関連づけられており、機序解明を目的とした経路研究における有用性を支持します。

SOCS-6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SOCS6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SOCS-6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SOCS6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSOCS6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SOCS-6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSOCS6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSOCS-6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSOCS6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSOCS-6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。