SNX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427326

概要

Snx5はソーティングネキシン5（SNX5）をコードしており、SNX5はPXドメインを含むアダプターとして、ホスホイノシチドに富むエンドソーム膜に結合し、エンドソームでのソーティングや膜チューブ形成に関与します。SNX5は受容体の輸送およびリサイクリング経路で機能し、初期エンドソームからのカーゴ回収を制御しつつエンドソーム輸送体の形状形成に関与するレトロマーやSNX-BAR関連複合体と協調して進む過程にも関与します。受容体のターンオーバーやシグナル伝達の持続時間を制御することで、SNX5は小胞輸送、細胞極性、膜恒常性に影響を与えます。ソーティングネキシンが関与するエンドサイトーシス輸送ネットワークの破綻は、神経変性、がんに伴うシグナル伝達の再配線、免疫機能障害と関連づけられており、Snx5はマウスモデルにおける経路志向の研究に有用なノードとなります。

SNX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSnx5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Snx5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Snx5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SNX5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SNX5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Snx5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SNX5の機能に不可欠なSnx5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Snx5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SNX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSNX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Snx5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SNX5 HDRプラスミド（m）および SNX5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSnx5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSnx5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。