Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SNAP 25 Plasmide Double Nickase (m): sc-423048-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SNAP 25 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SNAP 25 Double Nickase Plasmid (m) e il SNAP 25 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Snap25. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SNAP 25 Antibody (SP12): sc-20038
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SNAP 25 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423048-NIC | 20 µg | $410.00 |
Snap25 codifica la proteina associata ai sinaptosomi 25 (SNAP25), un componente fondamentale del complesso SNARE neuronale che guida l’ancoraggio delle vescicole sinaptiche e la fusione di membrana innescata dal calcio durante il rilascio di neurotrasmettitori. Interagendo con sintassina e VAMP/sinaptobrevina, SNAP25 regola l’esocitosi presinaptica, la plasticità sinaptica a breve termine e il riciclo delle vescicole dipendente dall’attività in circuiti eccitatori e inibitori. La segnalazione dipendente da SNAP25 si interseca con vie che controllano l’eccitabilità neuronale e lo sviluppo delle reti, rendendo Snap25 un locus ampiamente utilizzato per indagare i meccanismi della trasmissione sinaptica nei modelli murini. Alterazioni dell’espressione di SNAP25 o della funzione SNARE sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici in studi genetici e funzionali, a supporto della sua rilevanza per la ricerca sulle disfunzioni dei circuiti.
SNAP 25 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Snap25 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Snap25. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Snap25. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Snap25 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.