SMCHD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404142-ACT

SMCHD1（structural maintenance of chromosomes flexible hinge domain containing 1）は、ゲノム全体にわたって長距離のクロマチン相互作用と安定した転写抑制を支えるエピジェネティック制御因子である。ヒト細胞においてSMCHD1は、高次クロマチン構造の形成、特定座位でのDNAメチル化維持、反復配列要素のサイレンシングに寄与し、X染色体不活化やより広範なクロマチン凝縮プログラムとも交差する。その活性は、クロマチンリモデリングおよびヘテロクロマチン関連過程を介して、分化やゲノム安定性を司る遺伝子発現ネットワークに影響を与える。SMCHD1機能の変化は、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー2型やBosma無鼻症・小眼球症症候群などにみられるエピジェネティック制御異常と関連しており、クロマチン介在性の遺伝子制御機構を解明する上で重要な研究対象となっている。

SMCHD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMCHD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMCHD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMCHD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMCHD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMCHD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMCHD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMCHD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMCHD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMCHD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。