SMC3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403950-ACT

SMC3は、染色体構造維持（SMC）タンパク質の中核をなす因子をコードしており、SMC1Aおよび関連サブユニットとともにコヒーシン複合体を形成して、S期に姉妹染色分体の結合（コヒージョン）を確立し、正確な染色体分配を保証します。SMC3依存的なコヒーシンの動態は、有糸分裂にとどまらず、DNA二本鎖切断修復、複製フォークの安定化、さらにエンハンサー—プロモーター間コミュニケーションや転写プログラムに影響する高次ゲノム構造の制御にも関与します。これらの機能により、SMC3はゲノム安定性と細胞周期進行を制御する経路の中心に位置し、その破綻は染色体不安定性の表現型や、コヒーシン関連の発生異常疾患と結び付けられています。がん生物学の分野では、SMC3を含むコヒーシン活性の変化が、異数性、DNA修復能、転写ネットワークの再配線への影響という観点から、しばしば研究されています。

SMC3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMC3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMC3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。