SLUG Plasmide Double Nickase (h): sc-400389-NIC

SNAI2 codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco SLUG, un regolatore chiave della transizione epitelio–mesenchimale (EMT) che reprime geni epiteliali come CDH1 e rimodella i programmi citoscheletrici e di adesione per promuovere la motilità e la plasticità dello stato cellulare. SLUG integra segnali provenienti da vie dello sviluppo e della risposta allo stress, tra cui TGF-β, WNT/β-catenina, Notch e MAPK, per coordinare decisioni di linea, sopravvivenza e differenziamento. Nella biologia umana, un'alterata attività di SNAI2 è frequentemente associata a fenotipi di progressione tumorale, programmi trascrizionali legati all'invasione e stati adattativi alla terapia, e contribuisce anche a contesti della cresta neurale e dell'ematopoiesi. Queste proprietà rendono SLUG un nodo ampiamente utilizzato per analizzare il controllo trascrizionale dell'EMT, la migrazione cellulare, caratteristiche simil-staminali e le risposte al microambiente.

SLUG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SNAI2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SNAI2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SNAI2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SNAI2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.