SLC35F2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406765-ACT

SLC35F2（solute carrier family 35 member F2）はヒトの多回膜貫通型トランスポーターであり、小分子の細胞内取り込みや細胞内での取り扱いに関与すると考えられています。膜輸送（トラフィッキング）や外来性化合物（ゼノバイオティクス）の輸送過程における役割も報告されています。SLC35ファミリーの一員として、トランスポーター生物学、特定化合物に対する細胞感受性、ならびにストレス応答や生存経路に影響する細胞内曝露量の規定因子という観点から研究されています。SLC35F2の発現変動は、トランスクリプトーム解析データセットにおいてがん関連の表現型と関連づけられており、腫瘍細胞モデルでは薬剤応答や代謝的脆弱性を左右する機能的モジュレーターとして頻繁に評価されています。これらの特性により、SLC35F2は、輸送に連動したシグナル伝達、細胞適応度（フィットネス）、および化学的または遺伝学的摂動下での経路再配線（pathway rewiring）を機序的に研究するための有用な標的となっています。

SLC35F2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC35F2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC35F2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC35F2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC35F2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC35F2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC35F2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC35F2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC35F2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC35F2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。