Partículas Lentivirales de Activación (h) SLAM: sc-404289-LAC

SLAMF1 humano codifica SLAM (CD150), un receptor de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se expresa principalmente en células hematopoyéticas, incluidas las células T activadas, las células B, las células dendríticas y los macrófagos. SLAM actúa como un ligando propio y señaliza a través de motivos de cambio basados en tirosina de receptores inmunitarios (ITSM) para reclutar proteínas adaptadoras como SH2D1A/SAP y EAT-2, modulando vías posteriores que regulan la activación de linfocitos, la producción de citocinas, la citotoxicidad y las respuestas del centro germinal. Mediante la modulación de la organización de la sinapsis inmunitaria y de programas de señalización vinculados a NF-κB/MAPK, SLAM contribuye a coordinar la comunicación entre la inmunidad adaptativa e innata. La alteración de la señalización de SLAMF1 se ha asociado con fenotipos de desregulación inmunitaria y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología de las infecciones, las respuestas inflamatorias y los mecanismos de neoplasias hematológicas.

Las partículas de activación lentiviral SLAM (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SLAMF1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SLAM (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SLAMF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SLAM. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SLAMF1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.